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免提取DNA,轻松搞定小鼠基因分型

发布者:博迈德生物2024-06-0473

     基因分型是通过使用生物学试验检查个体的DNA序列的过程,也是将目标序列与另一个体的序列或参考序列进行比较来确定个体的遗传构成(基因型)差异的过程。


     传统做法是从组织样品中纯化基因组DNA进行基因分型PCR。即使使用快速提取试剂盒,该过程也可能至少需要0.5-1小时,并需要使用离心机和加热等实验室专用设备。使用到的提取试剂还需要相应的处理,需要较多的实验时间和实验成本。


     而采用小鼠基因型快速鉴定试剂盒,可以将组织样本直接用于PCR反应扩增,无需进行DNA纯化,也无需使用特殊设备和进行其他试剂处理。直接PCR使用原始样品(例如鼠尾、鼠耳)进行简单裂解即可进行PCR实验,可节省大量时间。

产品简介:


     本试剂盒适用于小鼠基因型的快速鉴定,无需破碎,酚氯仿抽提等操作,仅需将组织浸泡在裂解液中,55℃孵育10-30min,95℃加热5min,裂解产物可直接进行PCR扩增。本试剂盒可用于小鼠尾巴,耳朵以及脚趾等组织。


     试剂盒中含有扩增所用试剂2×HotStrat Taq PCR Master Mix,本产品含有热启动Taq酶,dNTP以及优化的缓冲体系,仅需加入引物与模板即可进行扩增,减少交叉污染,提高扩增特异性。

产品优势:


1. 无需提取基因组,裂解产物直接扩增,快速简单;


2. 配套热启动PCR预混液,特异性高;


3. 基于蛋白酶K的裂解液,适用性广。

实验案例:





图为分别扩增300bp,600bp,580bp,700bp,157bp片段。


1:取小鼠尾尖约2mm进行裂解,取2μl为模板进行扩增。


2:剪弃掉尾尖约1mm以后,再剪取2mm鼠尾进行裂解,取2μl为模板进行扩增。

常见问题及解决方案:


1. 小鼠尾巴扩增效果差。


① 经过多种基因扩增经验,取鼠尾时建议先剪去1mm左右尾尖,再取1-3mm作为样品进行裂解。


原因:尾尖毛发较多,裂解液很难完全浸入。剪去尾尖后再取样,增加剪切面更加容易裂解,释放基因组。


② 扩增时可减少裂解产物模板量至0.5-1μl


2. 小鼠趾甲裂解效果不好


① 可以把组织块剪大一些,即与指甲接触的肌肉部分,增加裂解液接触面积。


② 可以从PCR体系、反应程序(设置阳性对照)上优化。


3. 裂解组织后是否可以用分光光度计测浓度


不可以,因为裂解组织后含有buffer,蛋白酶K等,而且DNA的浓度低,测量浓度容易虚高。


4. 用两对引物同时扩增,扩增效果差


① 两对引物可能会互相干扰,建议单独扩增。或调整两对引物使用的比例。


② 重新设计引物,在保证引物特异性的前提下,使四条引物的Tm值尽量接近,差值不要太大(2-3℃);如果不重新设计引物,也可以适当调整退火温度,同时,适当延长退火时间(30s-1 min)。


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