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BC218-01	ArcticExpress(DE3)感受态细胞	20×100ul	420

储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。

产品说明：

ArcticExpress(DE3)细胞来源于BL21-Gold菌株，属于Lon和OmpT蛋白酶缺陷型的大肠杆菌B菌株。菌株含有庆大霉素抗性的质粒能稳定表达海洋细菌Oleispira antarctica的两个低温分子伴侣Cpn10和Cpn60。这些伴侣蛋白在较低温度（4-12℃）下，比大肠杆菌GroEL/GroES表现出更高的活性, 在低温下可以更好地促进重组蛋白的正确折叠，潜在地增加了可溶性重组蛋白的产率和活性，克服重组蛋白的错误折叠和不溶性。该菌株又具备λ噬菌体DE3基因区，可以表达T7 RNA聚合酶，适用于含有T7启动子的原核表达载体（如pET等）的高效表达。非T7启动子的表达载体（如pGEX、pMal，pTrc等载体）也可以在该菌株中表达。ArcticExpress(DE3)感受态细胞由特殊工艺制成，pUC19质粒检测转化效率大于1×107 cfu/μg DNA。

基因型:F– ompT hsdS(rB – mB –) dcm+ Tetr gal λ(DE3) endA Hte (cpn10 cpn60 Gentr )

菌株抗性：具有庆大霉素、四环素抗性。对氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、氯霉素敏感。

质粒转化步骤： 

1.将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入质粒DNA或5-10μl连接产物到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀；

2.冰水浴中放置30分钟，不要晃动；

3.42℃热击60秒钟，不要晃动；

4.冰水浴中放置2分钟，不要晃动；

5.加入500μl无菌的SOC或LB培养基；

6.置于37℃摇床中，150-200rpm震荡复苏培养60分钟；

7.取50-100μl菌液涂布在含有20ug/ml的庆大霉素和适当浓度的转化质粒的抗性抗生素的LB平板上。待液体吸干后，倒置平板，37℃培养12-16小时。

（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm离心30秒钟，弃掉上清，留100μl左右的液体，用200μl吸头轻轻吹打散菌块，取10μl重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。）

蛋白表达步骤：

1.挑取单菌落，接种到含5ml带抗生素的LB培养基中；

2.37℃，200rpm震荡培养细菌至对数生长期（OD600=0.4-0.8）；

3.加入IPTG到终浓度为0.4mM，37℃诱导2-4小时或16℃诱导过夜；

（低温诱导方法：37℃，200rpm震荡培养细菌到1-2个OD左右，然后将培养物降温至10–13°C，低温培养15分钟达到平衡，将IPTG添加到摇瓶中，最终浓度达到为0.1-0.5mM之间。继续诱导培养12-24小时。）

4.诱导完成后，离心收集菌体，用合适的方法（如考马斯亮蓝染胶法，Western-Blot法或酶活性分析法）分析菌体裂解物的总蛋白、上清和沉淀组分，明确表达产物的表达状况（可溶性或不溶性表达）；

5.大量表达时，可用10ml过夜培养物转接到1L培养基中，当培养到OD600=0.4-0.8时，加入终浓度为0.4mM的IPTG，37℃诱导2-4小时或16℃诱导过夜（不同蛋白表达的最佳条件有所不同，需在实验中优化）