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Cell Counting Kit-8

发布者:博迈德生物发布时间:2021-10-11170

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PA133-01 Cell Counting Kit-8 1ml 320
PA133-01 1mlx5 960


产品简介

Cell Counting Kit-8 简称CCK-8试剂盒,为MTT法的替代方法,是一种基于WST(水溶性四唑盐,化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏等试验

储存条件:4℃密封避光保存,有效期一年。

使用说明:

一、制作标准曲线(测定细胞具体数量时)

1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。

2、按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每组3-6个复孔。

3、接种后培养至细胞贴壁,然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD 值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X 轴),OD 值为纵坐标(Y 轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。)

二、细胞活性检测

1、在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(在37℃,5% CO2的条件下)。

2、向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

5、如果暂时不测定OD值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10μL 0.1MHCl或者1%SDS(W/V)溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

三、细胞增值-毒性检测

1、在96孔板中配置100 μL 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(在37 ℃5% CO2的条件下)。

2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6122448小时)。

3、向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK-8之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。

4、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

5、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

6、如果暂时不测定OD 值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10μL 0.1MHCl或者1%SDS(W/V)溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

 

活力计算:.

细胞活力(%)=[A(加药)A(空白)][ A(0加药)A(空白)]×100

A(加药):具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度

A(空白):具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度

A0 加药):具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力

 

注意事项:

建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。

白细胞可能需要培养较长时间。

当使用标准96 孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1 ,000/(100 μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 /( 100 μL培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10% 加入CCK-8溶液。

如果没有450nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm 之间的滤光片,但是450nm检测灵敏度最高。

培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。

 

详情见说明书